Anti-dsDNA Antilichamen
Antigeenspecificiteiten van canine ANA
Anti-dsDNA antilichamen worden zelden aangetroffen bij honden met SLE. Bij de hond bindt een zuur β-globuline, dat geen antilichaam is, aan DNA en ook aan het synthetische dubbelstrengs DNA-analoog polydeoxyadenylaat-deoxythymidylaat (dAdT) . Dit eiwit leidt tot vals-positieve reacties wanneer technieken op basis van de Farr-test worden gebruikt. De aard van dit eiwit is slecht gekarakteriseerd. Het is hitte-labiel en wordt vernietigd door verwarming gedurende 30 minuten bij 60°C, maar niet bij 58°C. Het bindt niet aan stafylokokkenproteïne A, lijkt geen glycoproteïne te zijn, zoals blijkt uit het feit dat het niet bindt aan linzen lectine, en wordt gedeeltelijk geremd door toevoeging van EDTA en vollediger door toevoeging van dextraansulfaat . De interferentie kan ook worden geremd door de toevoeging van natriumdodecylsulfaat en door het gebruik van een verhoogde ionensterkte en pH van de buffers.
De detectie van anti-dsDNA in sera van honden is daarom problematisch. Andere detectiesystemen zijn indirecte immunofluorescentie met gebruikmaking van Crithidia luciliae of Trypanosoma brucei en ELISA-technieken met gebruikmaking van sterk gezuiverd dsDNA. In alle studies vertonen de immunofluorescentietechnieken in het beste geval een lage incidentie van zwak positieve reacties. In twee andere studies waarin een combinatie van indirecte immunofluorescentie en ELISA werd gebruikt, werden zelden positieve reacties gezien. Het DNA-bindende eiwit in normale hondenserums zou, naast interferentie met de Farr assay, ook kunnen interfereren met de binding van specifieke anti-dsDNA antilichamen in ELISA. In een studie waarin deze vraag aan de orde kwam, was echter geen van de onderzochte hondensera in staat de binding van een murien anti-DNA monoklonaal antilichaam te verhinderen. Een studie waarbij gebruik werd gemaakt van een commercieel ELISA systeem toonde echter een relatief hoge DNA binding in sera van honden met SLE, en in mindere mate van honden met andere arthropathieën. De laatste auteurs merkten op dat sera die hoge dsDNA-bindingswaarden gaven ook sterk aan enkelstrengs (ss)DNA bonden, wat wijst op een mogelijke contaminatie van het dsDNA-substraat met ssDNA.
Aanwezigheid van anti-ssDNA aantonen is niet van waarde voor de diagnose van SLE bij de hond. In één studie gaven sera van 21% van 100 honden met SLE positieve resultaten, evenals 14% van de honden met positief ANA maar minder dan vier criteria voor SLE, en 26,8% van 56 honden met diverse infectieziekten, waaronder leishmaniose .
De aanwezigheid van antihiston antilichamen is sterk gecorreleerd met een positieve diagnose van SLE . In de meest uitgebreide studie gaven 71 van 100 sera van patiënten die aan ten minste vier ACR criteria voldeden een positief resultaat, vergeleken met 6,7% van 120 normale controles . Het patroon van herkenning verschilt echter van dat bij de mens. Met behulp van immunoblots herkende 54% van de sera van honden met SLE H4, en hetzelfde aantal herkende H3. Acht procent herkende H1, 22% H2A, en 20% H2B. In een andere studie werden antilichamen tegen H2B in geen van de 43 sera van honden met SLE aangetoond. In tegenstelling hiermee zijn H1 en H2B meer prominente auto-antigenen bij de mens. Een verder verschil is dat de histon determinanten waartegen de antilichamen bij de hond zijn gericht meestal trypsine-resistent zijn. Een recente studie maakte melding van de ontwikkeling van een flowcytometrische assay op basis van korrels voor de opsporing van antiston-antilichamen tegen honden, maar er was een slechte correlatie tussen deze assay en de standaard immunofluorescentietest voor ANA. De prevalentie van antihiston antilichamen werd onlangs onderzocht bij 43 honden met leishmaniose . Er was een significant hogere prevalentie van dergelijke antilichamen wanneer geïnfecteerde honden glomerulonefritis hadden (22/25 dieren) in vergelijking met geïnfecteerde honden zonder nierschade (7/18).
Veel van de andere antigenen die worden herkend door sera van menselijke SLE-patiënten worden ook herkend door sera van honden. Ongeveer 7% van de sera van honden met SLE precipiteren ribonucleoproteïne (RNP), en nog eens 12% detecteren zowel RNP als Sm antigeen. High-motility group (HMG) proteïnen werden door 20% van de sera herkend, waarbij HMG1 door 6% werd herkend en HMG2 door 18%. Geen sera herkend HMG14 en HMG17. In de eerder genoemde studie bevatten drie sera ook anti-Sjögren’s syndroom A antilichamen (anti-SSA), maar anti-SSB is nog niet opgespoord.
Van groot belang zijn antilichamen met een specificiteit die uniek lijkt te zijn voor sera van caninepatiënten met SLE, die aanvankelijk anti-type 1 (of T1) en anti-type 2 (of T2) werden genoemd. Deze zijn reactief met oplosbare nucleaire extracten, maar het T2 antigeen is afwezig in geëxtraheerde nucleaire antigeen preparaten. Anti-T1 is gericht tegen een belangrijk 43-kDa kernantigeen. Studies hebben bevestigd dat dit identiek is aan het 43-kDa glycoproteïne dat herkend wordt door sommige sera van canine SLE in de studies van Soulard e.a. . Dit is nu geïdentificeerd als hnRNP G en epitope mapping studies hebben binding aangetoond aan een centraal 33 aminozuur motief naast een tweede N-terminale regio van het molecuul. Interessant is dat veel sera van honden met SLE ook reageren met een ribosomaal antigeen van identiek moleculair gewicht.
Vier gevallen, met klinische verschijnselen die overeenkomen met SLE, zijn gerapporteerd waarin een hoog-titer antinucleolair antilichaam werd gedetecteerd. In drie van deze gevallen was polyartritis het belangrijkste symptoom, hoewel in één geval ook immuungemedieerde trombocytopenie, anemie, leukopenie en huideruptie optraden. De antilichaam specificiteit is onderzocht, en sera detecteren drie polypeptiden van 110, 95, en 45 kDa, die antigenisch kruisreactief zijn.
Canine ANA patronen omvatten homogene, gespikkelde, rand, en nucleolaire labeling. De homogene en gespikkelde patronen komen het meest voor. In een aantal studies is getracht een verband te leggen tussen de specifieke activiteit van antilichamen en nucleaire labelingpatronen. Vroegere studies hebben aangetoond dat anti-T1 (hnRNP G) een betrekkelijk fijn gespikkeld patroon geeft, anti-Sm en anti-RNP een grover gespikkeld, of reticulonodulair patroon, en het antihiston-antilichaam een in het algemeen homogeen patroon. Recentere studies hebben gebruik gemaakt van immunodiffusie , ELISA en immunoblots . Sera met een chromosoomreactiviteit vertonen een homogeen kernfluorescentiepatroon en neerslaan niet bij immunodiffusieanalyse met in de handel verkrijgbare ENA-preparaten. Sera die een negatieve chromosoomreactiviteit vertonen, vertonen vaker gevlekte patronen, en een deel daarvan is positief bij immunodiffusie. Identiteitslijnen met humaan reactieve sera werden aangetoond in het geval van anti-RNP en anti-Sm . Het auto-antigeen dat het vaakst herkend werd in ELISA en immunoblots was hnRNP G, een antigeen dat afwezig is in het commercieel verkrijgbare extract gemaakt voor het onderzoek van humane sera. Onderzoek van anti-RNP activiteit bevestigde dat canine sera reageren met dezelfde volledige major antigene regio van het 70K eiwit als humane sera.
Een recente studie heeft voor het eerst gesuggereerd dat het patroon van nucleaire labeling, beschouwd in samenhang met de aan- of afwezigheid van precipiterende antilichamen, een klinische betekenis kan hebben. Gespikkelde nucleaire labeling in afwezigheid van precipiterende antilichamen kwam vaker voor bij honden met musculoskeletale ziekte, terwijl honden met multisystemische immuungemedieerde ziekte vaker homogene nucleaire labeling en precipiterende antilichamen hadden .