Anticorps anti-dsDNA
Spécificités antigéniques de l’ANA canin
Les anticorps anti-dsDNA sont rarement rencontrés chez les chiens atteints de LED. Chez le chien, une β-globuline acide, qui n’est pas un anticorps, se lie à l’ADN et également à l’analogue synthétique de l’ADN double brin, le polydésoxyadénylate-désoxythymidylate (dAdT) . Cette protéine entraîne des réactions faussement positives lorsque des techniques basées sur le test de Farr sont utilisées. La nature de cette protéine est mal caractérisée. Elle est thermolabile et détruite par un chauffage de 30 minutes à 60°C, mais pas à 58°C . Elle ne se lie pas à la protéine A staphylococcique, ne semble pas être une glycoprotéine, comme en témoigne son incapacité à se lier à la lectine de lentille, et est partiellement inhibée par l’ajout d’EDTA et plus complètement par l’ajout de sulfate de dextran. L’interférence peut également être inhibée par l’ajout de dodécylsulfate de sodium et par l’utilisation d’une force ionique et d’un pH accrus des tampons .
La détection des anti-ADNd dans les sérums canins est donc problématique. D’autres systèmes de détection ont inclus l’immunofluorescence indirecte employant Crithidia luciliae ou Trypanosoma brucei et des techniques ELISA employant de l’ADNdb hautement purifié. Dans toutes les études, les techniques d’immunofluorescence montrent au mieux une faible incidence de réactions positives faibles. Dans deux autres études utilisant une combinaison d’immunofluorescence indirecte et d’ELISA, des réactions positives ont été rarement observées. La protéine de liaison à l’ADN présente dans les sérums canins normaux pourrait, en plus d’interférer avec le test de Farr, interférer également avec la liaison des anticorps spécifiques anti-ADNdN dans le test ELISA. Cependant, dans une étude qui a abordé cette question, aucun des sérums canins testés n’a été capable d’inhiber la liaison d’un anticorps monoclonal murin anti-ADN. Cependant, une étude utilisant un système ELISA commercial a montré une liaison à l’ADN relativement élevée dans les sérums de chiens atteints de LED et, dans une moindre mesure, de chiens atteints d’autres arthropathies. Ces derniers auteurs ont noté que les sérums qui donnaient des valeurs élevées de liaison à l’ADNdb se liaient également fortement à l’ADN simple brin (ss), suggérant une possible contamination du substrat d’ADNdb par l’ADNs .
La démonstration de la présence d’anti-ADNsb n’a aucune valeur pour le diagnostic du LED chez le chien. Dans une étude, les sérums de 21 % des 100 chiens atteints de LED ont donné des résultats positifs, tout comme 14 % des chiens ayant un ANA positif mais moins de quatre critères de LED, et 26,8 % des 56 chiens atteints de maladies infectieuses diverses, y compris la leishmaniose .
La présence d’anticorps antihistones est fortement corrélée à un diagnostic positif de LED . Dans l’étude la plus vaste, 71 des 100 sérums de patients remplissant au moins quatre critères ACR ont donné des résultats positifs, contre 6,7 % de 120 témoins normaux . Le modèle de reconnaissance, cependant, diffère de celui de l’homme. En utilisant des immunoblots, 54 % des sérums de chiens atteints de LED ont reconnu H4, et le même nombre a reconnu H3. Huit pour cent ont reconnu le H1, 22 % le H2A et 20 % le H2B. Dans une autre étude, les anticorps contre H2B n’ont été détectés dans aucun des 43 sérums de chiens atteints de LED. En revanche, H1 et H2B sont des auto-antigènes plus importants chez l’homme. Une autre différence réside dans le fait que les déterminants des histones contre lesquels les anticorps canins sont dirigés sont pour la plupart résistants à la trypsine. Une étude récente a rapporté le développement d’un test cytométrique en flux à base de billes pour la détection des anticorps anti-histones canins, mais la corrélation entre ce test et le test standard d’immunofluorescence pour l’ANA était faible. La prévalence des anticorps anti-histones a récemment été examinée chez 43 chiens atteints de leishmaniose . La prévalence de ces anticorps était significativement plus élevée lorsque les chiens infectés présentaient une glomérulonéphrite (22/25 animaux) par rapport aux chiens infectés sans atteinte rénale (7/18).
Plusieurs des autres antigènes reconnus par les sérums de patients humains atteints de LED sont également reconnus par les sérums canins. Environ 7 % des sérums de chiens atteints de LED précipitent la ribonucléoprotéine (RNP), et 12 % supplémentaires détectent à la fois la RNP et l’antigène Sm . Les protéines du groupe à haute mobilité (HMG) ont été reconnues par 20 % des sérums, la HMG1 étant détectée par 6 % d’entre eux et la HMG2 par 18 %. Aucun sérum n’a reconnu les protéines HMG14 et HMG17. Dans l’étude susmentionnée, trois sérums contenaient également un anticorps anti-syndrome de Sjögren A (anti-SSA), mais l’anti-SSB n’a pas encore été détecté.
De grand intérêt sont les anticorps avec une spécificité qui semble être unique pour les sérums de patients canins atteints de LED, qui ont été initialement appelés anti-type 1 (ou T1) et anti-type 2 (ou T2) . Ils sont réactifs avec les extraits nucléaires solubles, mais l’antigène T2 est absent des préparations d’antigènes nucléaires extraits. L’anti-T1 est dirigé contre un antigène nucléaire majeur de 43 kDa. Des études ont confirmé qu’il est identique à la glycoprotéine de 43 kDa reconnue par certains sérums du LED canin dans les études de Soulard et al. Celle-ci a maintenant été identifiée comme étant la hnRNP G et des études de cartographie épitopique ont démontré la liaison à un motif central de 33 acides aminés en plus d’une seconde région N-terminale de la molécule. Il est intéressant de noter que de nombreux sérums de chiens atteints de LED réagissent également avec un antigène ribosomal de poids moléculaire identique .
Quatre cas, avec des signes cliniques compatibles avec le LED, ont été rapportés dans lesquels un anticorps antinucléaire à haut titre a été détecté. Dans trois d’entre eux, la polyarthrite était un signe majeur de présentation , bien qu’un cas ait eu une thrombocytopénie à médiation immunitaire concomitante, une anémie, une leucopénie et une éruption cutanée . La spécificité des anticorps a été examinée, et les sérums détectent trois polypeptides de 110, 95 et 45 kDa, qui présentent une réactivité antigénique croisée .
Les schémas ANA canins comprennent un marquage homogène, moucheté, en bordure et nucléolaire. Les motifs homogènes et mouchetés sont les plus courants. Un certain nombre d’études ont tenté de corréler l’activité spécifique des anticorps avec les schémas de marquage nucléaire. Les premières études ont démontré que l’anticorps anti-T1 (hnRNP G) donne une image mouchetée relativement fine, l’anti-Sm et l’anti-RNP donnent une image mouchetée plus grossière, ou réticulonodulaire, et l’anticorps antihistone donne une image généralement homogène. Des études plus récentes ont utilisé l’immunodiffusion, l’ELISA et les immunoblots. Les sérums qui présentent une réactivité chromosomique ont un profil de fluorescence nucléaire homogène et ne précipitent pas lors de l’analyse par immunodiffusion en utilisant des préparations ENA disponibles dans le commerce. Les sérums qui présentent une réactivité chromosomique négative sont plus susceptibles de présenter des motifs mouchetés, et une partie d’entre eux sont positifs en immunodiffusion. Des lignes d’identité avec les sérums réactifs humains ont été montrées dans le cas de l’anti-RNP et de l’anti-Sm . L’auto-antigène reconnu le plus fréquemment dans l’ELISA et les immunoblots était hnRNP G, un antigène absent de l’extrait commercialisé pour l’examen des sérums humains. L’examen de l’activité anti-RNP a confirmé que les sérums canins réagissent avec la même région antigénique majeure complète de la protéine 70K que les sérums humains .
Une étude récente a suggéré pour la première fois que le modèle de marquage nucléaire, considéré conjointement avec la présence ou l’absence d’anticorps précipitants, peut avoir une signification clinique. Un marquage nucléaire moucheté en l’absence d’anticorps précipitants est plus fréquemment observé chez les chiens atteints d’une maladie musculo-squelettique, tandis que les chiens atteints d’une maladie multisystémique à médiation immunitaire présentent plus souvent un marquage nucléaire homogène et des anticorps précipitants .
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