Anti-dsDNA

Specificità degli ANA canini

Gli anticorpi anti-dsDNA si incontrano raramente nei cani con il LES. Nei cani, una β-globulina acida, che non è un anticorpo, si lega al DNA e anche all’analogo sintetico del DNA a doppio filamento polidossiadenilato-deossitimidilato (dAdT) . Questa proteina porta a reazioni falso-positive quando vengono impiegate tecniche basate sul test di Farr. La natura di questa proteina è scarsamente caratterizzata. È labile al calore e viene distrutta dal riscaldamento per 30 minuti a 60°C, ma non a 58°C. Non si lega alla proteina A dello stafilococco, non sembrerebbe essere una glicoproteina, come evidenziato dal mancato legame alla lectina di lenticchie, ed è parzialmente inibita dall’aggiunta di EDTA e più completamente dall’aggiunta di destrano solfato. L’interferenza può anche essere inibita dall’aggiunta di sodio dodecil solfato e dall’uso di una maggiore forza ionica e del pH dei tamponi.

Il rilevamento di anti-dsDNA nei sieri canini è, quindi, problematico. Altri sistemi di rilevamento hanno incluso l’immunofluorescenza indiretta utilizzando Crithidia luciliae o Trypanosoma brucei e tecniche ELISA utilizzando dsDNA altamente purificato. In tutti gli studi, le tecniche di immunofluorescenza mostrano al massimo una bassa incidenza di reazioni debolmente positive. In altri due studi che utilizzano una combinazione di immunofluorescenza indiretta e ELISA, le reazioni positive sono state viste raramente. La proteina legante il DNA nei sieri canini normali potrebbe, oltre a interferire con il test di Farr, anche interferire con il legame degli anticorpi specifici anti-dsDNA in ELISA. Tuttavia, in uno studio che ha affrontato questa domanda, nessuno dei sieri canini testati è stato in grado di inibire il legame di un anticorpo monoclonale anti-DNA murino. Tuttavia, uno studio che utilizzava un sistema ELISA commerciale ha mostrato un legame relativamente elevato al DNA nei sieri di cani con il LES e, in misura minore, in quelli di cani con altre artropatie. Questi ultimi autori hanno notato che i sieri che hanno dato valori elevati di legame al dsDNA si sono anche legati fortemente al DNA a singolo filamento (ss), suggerendo una possibile contaminazione del substrato dsDNA con ssDNA. In uno studio, i sieri del 21% di 100 cani con il LES hanno dato risultati positivi, così come il 14% dei cani con ANA positivo ma meno di quattro criteri per il LES, e il 26,8% di 56 cani con varie malattie infettive, compresa la leishmaniosi .

La presenza di anticorpi anti-istone è altamente correlata con una diagnosi positiva di LES . Nello studio più ampio, 71 su 100 sieri di pazienti che soddisfano almeno quattro criteri ACR hanno dato risultati positivi, rispetto al 6,7% di 120 controlli normali. Il modello di riconoscimento, tuttavia, differisce da quello negli esseri umani. Usando gli immunoblot, il 54% dei sieri dei cani con il LES ha riconosciuto H4, e lo stesso numero ha riconosciuto H3. L’8% ha riconosciuto H1, il 22% H2A e il 20% H2B. In un altro studio, gli anticorpi a H2B non sono stati rilevati in nessuno dei 43 sieri di cani con il LES. Al contrario, H1 e H2B sono autoantigeni più prominenti nell’uomo. Un’ulteriore differenza è che i determinanti istonici contro cui sono diretti gli anticorpi canini sono per lo più resistenti alla tripsina. Uno studio recente ha riportato lo sviluppo di un test basato su microsfere a flusso per la rilevazione di anticorpi canini anti-istone, ma c’era una scarsa correlazione tra questo test e il test standard di immunofluorescenza per gli ANA. La prevalenza di anticorpi anti-istone è stata recentemente esaminata in 43 cani con leishmaniosi. C’era una prevalenza significativamente maggiore di tali anticorpi quando i cani infetti avevano una glomerulonefrite (22/25 animali) rispetto ai cani infetti senza danno renale (7/18).

Molti degli altri antigeni che sono riconosciuti dai sieri dei pazienti umani con SLE sono riconosciuti anche dai sieri canini. Circa il 7% dei sieri di cani con il LES precipita la ribonucleoproteina (RNP), e un ulteriore 12% rileva sia la RNP che l’antigene Sm. Le proteine del gruppo ad alta motilità (HMG) sono state riconosciute dal 20% dei sieri, con HMG1 rilevato dal 6% e HMG2 dal 18%. Nessun siero ha riconosciuto HMG14 e HMG17. Nel suddetto studio, tre sieri contenevano anche l’anticorpo anti sindrome di Sjögren A (anti-SSA), ma l’anti-SSB non è ancora stato rilevato.

Di grande interesse sono gli anticorpi con una specificità che sembra essere unica per i sieri di pazienti canini con SLE, che sono stati inizialmente denominati anti-tipo 1 (o T1) e anti-tipo 2 (o T2) . Questi sono reattivi con estratti nucleari solubili, ma l’antigene T2 è assente dalle preparazioni di antigene nucleare estratto. L’anti-T1 è diretto contro un importante antigene nucleare di 43 kDa. Gli studi hanno confermato che questo è identico alla glicoproteina 43-kDa riconosciuta da alcuni sieri canini del LES negli studi di Soulard et al. Questa è stata ora identificata come hnRNP G e gli studi di mappatura dell’epitopo hanno dimostrato il legame a un motivo centrale di 33 aminoacidi oltre a una seconda regione N-terminale della molecola. È interessante notare che molti sieri di cani con il LES reagiscono anche con un antigene ribosomiale di peso molecolare identico.

Sono stati riportati quattro casi, con segni clinici compatibili con il LES, in cui è stato rilevato un anticorpo antinucleare ad alto titolo. In tre di questi, la poliartrite era uno dei principali segni di presentazione, anche se un caso aveva una concomitante trombocitopenia immunomediata, anemia, leucopenia ed eruzione cutanea. La specificità dell’anticorpo è stata esaminata e i sieri rilevano tre polipeptidi di 110, 95 e 45 kDa, che sono antigenicamente cross-reattivi.

I modelli ANA canini includono etichettatura omogenea, a macchie, a cerchi e nucleolare. I pattern omogeneo e maculato sono i più comuni. Un certo numero di studi ha tentato di correlare l’attività anticorpale specifica con i pattern di marcatura nucleare. I primi studi hanno dimostrato che l’anti-T1 (hnRNP G) dà un pattern a macchie relativamente fine, l’anti-Sm e l’anti-RNP danno un pattern a macchie più grossolane, o reticulonodulare, e l’anticorpo anti-istone dà un pattern generalmente omogeneo. Studi più recenti hanno impiegato immunodiffusione, ELISA e immunoblots. I sieri che mostrano una reattività cromosomica mostrano un pattern di fluorescenza nucleare omogeneo e non riescono a precipitare all’analisi di immunodiffusione utilizzando preparazioni ENA disponibili in commercio. I sieri che mostrano una reattività cromosomica negativa hanno maggiori probabilità di mostrare pattern a macchie, e una parte è positiva all’immunodiffusione. Linee di identità con sieri umani reattivi sono state mostrate nel caso di anti-RNP e anti-Sm . L’autoantigene riconosciuto più frequentemente in ELISA e immunoblots era hnRNP G, un antigene assente dall’estratto disponibile in commercio fatto per l’esame dei sieri umani. L’esame dell’attività anti-RNP ha confermato che i sieri canini reagiscono con la stessa regione antigenica principale completa della proteina 70K dei sieri umani.

Un recente studio ha suggerito per la prima volta che il modello di etichettatura nucleare, considerato insieme alla presenza o assenza di anticorpi precipitanti, può avere un significato clinico. L’etichettatura nucleare punteggiata in assenza di anticorpi precipitanti si è verificata più frequentemente nei cani con malattia muscolo-scheletrica, mentre i cani con malattia immunomediata multisistemica avevano più spesso un’etichettatura nucleare omogenea e anticorpi precipitanti.