Anti-dsDNA-antikroppar
Antigenspecificiteter för ANA hos hundar
Anti-dsDNA-antikroppar förekommer sällan hos hundar med SLE. Hos hundar binder ett surt β-globulin, som inte är en antikropp, till DNA och även till den syntetiska dubbelsträngade DNA-analogen polydeoxyadenylat-deoxythymidylat (dAdT) . Detta protein leder till falskt positiva reaktioner när tekniker baserade på Farr-analysen används . Detta proteins natur är dåligt karakteriserad. Det är värmelabilt och förstörs genom upphettning i 30 minuter vid 60 °C, men inte vid 58 °C . Det binder inte till stafylokockprotein A, verkar inte vara ett glykoprotein, vilket framgår av att det inte binder till linslektin, och det hämmas delvis genom tillsats av EDTA och mer fullständigt genom tillsats av dextransulfat . Interferensen kan också hämmas genom tillsats av natriumdodecylsulfat och genom användning av ökad jonstyrka och pH-värde i buffertarna.
Detektering av anti-dsDNA i serum från hundar är därför problematisk. Andra detektionssystem har omfattat indirekt immunofluorescens med Crithidia luciliae eller Trypanosoma brucei och ELISA-tekniker med höggradigt renat dsDNA. I alla studier visar immunofluorescensmetoderna i bästa fall en låg förekomst av svagt positiva reaktioner. I ytterligare två studier där man använde en kombination av indirekt immunofluorescens och ELISA, sågs sällan positiva reaktioner. Det DNA-bindande proteinet i normala hundserum kan, förutom att det stör Farr-analysen, även störa bindningen av specifika anti-dsDNA-antikroppar i ELISA. I en studie som behandlade denna fråga kunde dock inget av de undersökta hundserummen hämma bindningen av en murin monoklonal anti-DNA-antikropp. I en studie där man använde ett kommersiellt ELISA-system visades dock en relativt hög DNA-bindning i serum från hundar med SLE, och i mindre utsträckning från hundar med andra artropatier . De sistnämnda författarna noterade att serum som gav höga dsDNA-bindningsvärden även bundit starkt till enkelsträngat (ss)DNA, vilket tyder på en möjlig kontaminering av dsDNA-substratet med ssDNA .
Demonstration av förekomsten av anti-ssDNA är inte av något värde för diagnosen av SLE hos hundar. I en studie gav serum från 21 % av 100 hundar med SLE positiva resultat, liksom 14 % av hundar med positiv ANA men mindre än fyra kriterier för SLE och 26,8 % av 56 hundar med diverse infektionssjukdomar, inklusive leishmanios .
Närvaron av antihistonantikroppar är starkt korrelerad med en positiv diagnos av SLE . I den mest omfattande studien gav 71 av 100 serum från patienter som uppfyllde minst fyra ACR-kriterier positiva resultat, jämfört med 6,7 % av 120 normala kontroller . Erkännandemönstret skiljer sig dock från det hos människor. Med hjälp av immunoblots kände 54 % av serum från hundar med SLE igen H4, och lika många kände igen H3. Åtta procent kände igen H1, 22 % H2A och 20 % H2B . I en annan studie upptäcktes inte antikroppar mot H2B i något av 43 serum från hundar med SLE . Däremot är H1 och H2B mer framträdande autoantigener hos människan . Ytterligare en skillnad är att de histondeterminanter som antikroppar från hundar är riktade mot för det mesta är trypsinresistenta . I en nyligen genomförd studie rapporterades om utvecklingen av ett flödescytometriskt pärlbaserat test för detektion av antihistonantikroppar hos hundar, men det fanns en dålig korrelation mellan detta test och standardtestet för immunofluorescens för ANA . Förekomsten av antihistonantikroppar har nyligen undersökts hos 43 hundar med leishmanios . Det fanns en betydligt större förekomst av sådana antikroppar när infekterade hundar hade glomerulonefrit (22/25 djur) jämfört med infekterade hundar utan njurskada (7/18).
Många av de andra antigener som känns igen av serum från mänskliga SLE-patienter känns också igen av serum från hundar. Cirka 7 % av serum från hundar med SLE fäller ribonukleoprotein (RNP), och ytterligare 12 % upptäcker både RNP och Sm-antigen . Proteiner från högmotilitetsgruppen (HMG) kände man igen i 20 % av sera, där HMG1 upptäcktes av 6 % och HMG2 av 18 %. Inga sera kände igen HMG14 och HMG17. I den tidigare nämnda studien innehöll tre serum också antikroppar mot Släktssyndrom A (anti-SSA), men anti-SSB har ännu inte påvisats.
Av stort intresse är antikroppar med en specificitet som verkar vara unik för serum från hundpatienter med SLE, som ursprungligen benämndes anti-typ 1 (eller T1) och anti-typ 2 (eller T2) . Dessa är reaktiva med lösliga kärnextrakt, men T2-antigenet saknas i extraherade kärnantigenpreparat. Anti-T1 är riktat mot ett viktigt 43 kDa kärnantigen . Studier har bekräftat att detta är identiskt med det 43-kDa glykoprotein som känns igen av vissa SLE-serum från hundar i studierna av Soulard et al . Detta har nu identifierats som hnRNP G och epitopkartläggningsstudier har visat att det finns en bindning till ett centralt motiv av 33 aminosyror utöver en andra N-terminal region av molekylen . Intressant nog reagerar många serum från hundar med SLE också med ett ribosomalt antigen med identisk molekylvikt .
Fyra fall, med kliniska tecken som är kompatibla med SLE, har rapporterats där en högtiter antinukleolär antikropp har påvisats. I tre av dessa var polyartrit ett viktigt tecken , även om ett fall hade samtidig immunmedierad trombocytopeni, anemi, leukopeni och hudutslag . Antikroppsspecificiteten har undersökts, och serum påvisar tre polypeptider på 110, 95 och 45 kDa, som är antigeniskt korsreaktiva.
Anna-mönster hos hundar omfattar homogen, fläckig, rand- och nukleolär märkning. De homogena och fläckiga mönstren är vanligast. I ett antal studier har man försökt att korrelera specifik antikroppsaktivitet med kärnmärkningsmönster. Tidiga studier visade att anti-T1 (hnRNP G) ger ett relativt fint spottat mönster, anti-Sm och anti-RNP ger ett grövre spottat eller retikulonodulärt mönster och antihistonantikroppen ger ett allmänt homogent mönster. I nyare studier har man använt sig av immunodiffusion, ELISA och immunoblots . Sera som uppvisar kromosomal reaktivitet uppvisar ett homogent kärnfluorescensmönster och fäller inte ut vid immunodiffusionsanalys med hjälp av kommersiellt tillgängliga ENA-preparat. Sera som uppvisar negativ kromosomreaktivitet uppvisar oftare fläckiga mönster, och en del är positiva vid immunodiffusion. Identitetslinjer med humanreaktiva serum visades för anti-RNP och anti-Sm . Det autoantigen som oftast känns igen i ELISA och immunoblots var hnRNP G, ett antigen som saknas i det kommersiellt tillgängliga extraktet som tillverkats för undersökning av humana serum. Undersökning av anti-RNP-aktivitet bekräftade att hundserum reagerar med samma fullständiga antigena huvudregion av 70K-proteinet som humana serum .
En nyligen genomförd studie har för första gången föreslagit att mönstret för kärnmärkningen, betraktat i samband med närvaron eller frånvaron av utfällande antikroppar, kan ha klinisk betydelse. Spetsig kärnmärkning i avsaknad av fällande antikroppar förekom oftare hos hundar med muskuloskeletala sjukdomar, medan hundar med multisystemisk immunmedierad sjukdom oftare hade homogen kärnmärkning och fällande antikroppar.