Anti-dsDNA protilátky

Antigenové specifity psích ANA

Anti-dsDNA protilátky se u psů se SLE vyskytují zřídka. U psů se kyselý β-globulin, který není protilátkou, váže na DNA a také na syntetický dvouřetězcový analog DNA polydeoxyadenylát-deoxythymidylát (dAdT) . Tento protein vede k falešně pozitivním reakcím při použití technik založených na Farrově testu . Povaha tohoto proteinu je nedostatečně charakterizována. Je tepelně labilní a ničí se zahříváním po dobu 30 minut při 60 °C, ale ne při 58 °C . Neváže se na stafylokokový protein A, nezdá se, že by byl glykoproteinem, o čemž svědčí neschopnost vázat se na čočkový lektin, a je částečně inhibován přidáním EDTA a úplněji přidáním dextran sulfátu . Interferenci lze rovněž potlačit přídavkem dodecylsulfátu sodného a použitím zvýšené iontové síly a pH pufrů .

Detekce anti-dsDNA v psích sérech je proto problematická. Mezi další detekční systémy patří nepřímá imunofluorescence využívající Crithidia luciliae nebo Trypanosoma brucei a techniky ELISA využívající vysoce purifikovanou dsDNA. Ve všech studiích vykazují imunofluorescenční techniky v nejlepším případě nízký výskyt slabě pozitivních reakcí. V dalších dvou studiích využívajících kombinaci nepřímé imunofluorescence a ELISA byly pozitivní reakce pozorovány jen zřídka . Protein vázající DNA v normálních psích sérech by mohl kromě interference s Farrovým testem také interferovat s vazbou specifických anti-dsDNA protilátek v ELISA. Ve studii, která se touto otázkou zabývala, však žádné z testovaných psích sér nebylo schopno inhibovat vazbu myší monoklonální protilátky proti DNA. Jedna studie využívající komerční systém ELISA však prokázala poměrně vysokou vazbu DNA v sérech psů se SLE a v menší míře u psů s jinými artropatiemi . Posledně jmenovaní autoři poznamenali, že séra, která poskytovala vysoké hodnoty vazby dsDNA, se také silně vázala na jednořetězcovou (ss)DNA, což naznačuje možnou kontaminaci substrátu dsDNA ssDNA .

Prokázání přítomnosti anti-ssDNA nemá pro diagnostiku SLE u psů žádnou hodnotu. V jedné studii poskytla séra 21 % ze 100 psů se SLE pozitivní výsledky, stejně jako 14 % psů s pozitivní ANA, ale méně než čtyřmi kritérii pro SLE, a 26,8 % z 56 psů s různými infekčními chorobami, včetně leishmaniózy .

Přítomnost antihistonových protilátek vysoce koreluje s pozitivní diagnózou SLE . V nejrozsáhlejší studii poskytlo 71 ze 100 sér pacientů splňujících alespoň čtyři kritéria ACR pozitivní výsledky ve srovnání s 6,7 % ze 120 normálních kontrol . Vzor rozpoznávání se však liší od rozpoznávání u lidí. Pomocí imunoblotů 54 % sér od psů se SLE rozpoznalo H4 a stejný počet rozpoznal H3. Osm procent rozpoznalo H1, 22 % H2A a 20 % H2B . V jiné studii nebyly protilátky proti H2B zjištěny v žádném ze 43 sér psů se SLE . Naproti tomu H1 a H2B jsou významnějšími autoantigeny u člověka . Další rozdíl spočívá v tom, že histonové determinanty, proti kterým jsou namířeny protilátky u psů, jsou většinou odolné vůči trypsinu . V nedávné studii byl popsán vývoj průtokového cytometrického testu na bázi kuliček pro detekci psích anti-histonových protilátek, ale byla zjištěna slabá korelace mezi tímto testem a standardním imunofluorescenčním testem na ANA . Prevalence antihistonových protilátek byla nedávno zkoumána u 43 psů s leishmaniózou . U infikovaných psů s glomerulonefritidou (22/25 zvířat) byla zjištěna významně vyšší prevalence těchto protilátek ve srovnání s infikovanými psy bez poškození ledvin (7/18).

Mnoho dalších antigenů, které jsou rozpoznávány séry lidských pacientů se SLE, je rozpoznáváno i psími séry. Přibližně 7 % sér psů se SLE precipituje ribonukleoprotein (RNP) a dalších 12 % detekuje jak RNP, tak Sm antigen . Proteiny vysoce pohyblivé skupiny (HMG) rozpoznalo 20 % sér, přičemž HMG1 detekovalo 6 % a HMG2 18 %. Žádné sérum nerozpoznalo HMG14 a HMG17. Ve výše zmíněné studii obsahovala tři séra také protilátku anti-Sjögrenův syndrom A (anti-SSA), ale anti-SSB dosud nebyla detekována.

Velmi zajímavé jsou protilátky se specifitou, která se zdá být jedinečná pro séra psích pacientů se SLE, které byly původně označeny jako anti-typ 1 (nebo T1) a anti-typ 2 (nebo T2) . Ty reagují s rozpustnými jadernými extrakty, ale antigen T2 v extrahovaných preparátech jaderného antigenu chybí. Anti-T1 je namířena proti hlavnímu jadernému antigenu o velikosti 43 kDa . Studie potvrdily, že je totožný s 43-kDa glykoproteinem rozpoznávaným některými psími séry SLE ve studiích Soularda a spol. Ten byl nyní identifikován jako hnRNP G a studie mapování epitopů prokázaly vazbu na centrální motiv 33 aminokyselin kromě druhé N-koncové oblasti molekuly . Je zajímavé, že mnoho sér od psů se SLE reaguje také s ribozomálním antigenem o identické molekulové hmotnosti .

Byly zaznamenány čtyři případy s klinickými příznaky slučitelnými se SLE, u kterých byla zjištěna antinukleární protilátka ve vysokém titru. U tří z nich byla hlavním příznakem polyartritida , ačkoli v jednom případě byla současně přítomna imunitně zprostředkovaná trombocytopenie, anémie, leukopenie a kožní erupce . Byla zkoumána specifita protilátek a v séru byly zjištěny tři polypeptidy o velikosti 110, 95 a 45 kDa, které jsou antigenně zkříženě reaktivní .

Styly ANA u psů zahrnují homogenní, skvrnité, okrajové a nukleolární značení. Nejčastější jsou homogenní a skvrnité vzory. Řada studií se pokusila korelovat specifickou aktivitu protilátek se vzory jaderného značení. Dřívější studie prokázaly, že protilátka anti-T1 (hnRNP G) poskytuje relativně jemný skvrnitý vzor, protilátky anti-Sm a anti-RNP poskytují hrubší skvrnitý nebo retikulonodulární vzor a protilátka antihiston poskytuje obecně homogenní vzor . V novějších studiích byla použita imunodifuze , ELISA a imunobloty . Séra, která vykazují chromozomální reaktivitu, vykazují homogenní vzor jaderné fluorescence a nesrážejí se při imunodifuzní analýze s použitím komerčně dostupných přípravků ENA. Séra, která vykazují negativní chromozomální reaktivitu, vykazují spíše skvrnité vzory a část z nich je pozitivní při imunodifuzi. V případě anti-RNP a anti-Sm byla prokázána shoda s lidskými reaktivními séry. Autoantigenem nejčastěji rozpoznávaným v ELISA a imunoblotech byl hnRNP G, antigen nepřítomný v komerčně dostupném extraktu vyrobeném pro vyšetření lidských sér. Vyšetření anti-RNP aktivity potvrdilo, že psí séra reagují se stejnou úplnou hlavní antigenní oblastí proteinu 70K jako lidská séra .

Nedávná studie poprvé naznačila, že vzor jaderného značení, posuzovaný ve spojení s přítomností nebo nepřítomností precipitujících protilátek, může mít klinický význam. Skvrnité jaderné značení při absenci precipitujících protilátek se častěji vyskytovalo u psů s muskuloskeletálním onemocněním, zatímco psi s multisystémovým imunitně zprostředkovaným onemocněním měli častěji homogenní jaderné značení a precipitující protilátky .