Anti-dsDNS antitestek

A kutya ANA antigénspecifikussága

Az anti-dsDNS antitestek ritkán fordulnak elő SLE-s kutyáknál. Kutyákban egy savas β-globulin, amely nem antitest, kötődik a DNS-hez és a szintetikus kettősszálú DNS analóg polideoxi-adenilát-deoxi-thymidiláthoz (dAdT) is . Ez a fehérje hamis pozitív reakciókhoz vezet, amikor a Farr-teszten alapuló technikákat alkalmaznak . E fehérje természete kevéssé jellemezhető. Hőlabilis, és 60°C-on 30 percig tartó melegítés hatására elpusztul, de 58°C-on nem. Nem kötődik a staphylococcus A fehérjéhez, nem tűnik glikoproteinnek, amit az is bizonyít, hogy nem kötődik lencse lektinhez, és EDTA hozzáadása részben, dextránsulfát hozzáadása pedig teljesen gátolja . Az interferencia nátrium-dodecil-szulfát hozzáadásával és a pufferek megnövelt ionerősségének és pH-értékének alkalmazásával is gátolható .

Az anti-dsDNS kimutatása kutyaszérumokban ezért problematikus. Más kimutatási rendszerek közé tartozik a Crithidia luciliae vagy Trypanosoma brucei felhasználásával végzett indirekt immunfluoreszcencia és a nagymértékben tisztított dsDNS-t alkalmazó ELISA-technika. Az immunfluoreszcens technikák minden vizsgálatban a gyenge pozitív reakciók legfeljebb alacsony előfordulását mutatják. Két további, közvetett immunfluoreszcencia és ELISA kombinációját alkalmazó vizsgálatban ritkán fordult elő pozitív reakció . A normál kutyaszérumokban lévő DNS-kötő fehérje a Farr-teszt zavarásán túlmenően zavarhatja a specifikus anti-dsDNS-antitestek ELISA-ban történő kötődését is. Egy ezzel a kérdéssel foglalkozó vizsgálatban azonban a vizsgált kutyaszérumok egyike sem volt képes gátolni egy egér anti-DNS monoklonális antitest kötődését . Egy kereskedelmi ELISA-rendszert alkalmazó vizsgálat azonban viszonylag magas DNS-kötődést mutatott ki SLE-ben szenvedő kutyákból, és kisebb mértékben más ízületi betegségekben szenvedő kutyákból származó szérumokban . Ez utóbbi szerzők megjegyezték, hogy a magas dsDNS-kötési értékeket adó szérumok erősen kötődtek egyszálú (ss)DNS-hez is, ami a dsDNS-szubsztrát esetleges szennyeződésére utal ssDNS-szel .

Az anti-ssDNS jelenlétének kimutatása nem jelent értéket a kutyák SLE diagnózisában. Egy vizsgálatban 100 SLE-ben szenvedő kutya 21%-ának szérumai adtak pozitív eredményt, csakúgy, mint a pozitív ANA-t mutató, de az SLE négy kritériumánál kevesebbet mutató kutyák 14%-a, valamint 56 különböző fertőző betegségben, többek között leishmaniosisban szenvedő kutya 26,8%-a .

Az antihiszton antitestek jelenléte erősen korrelál az SLE pozitív diagnózisával . A legkiterjedtebb vizsgálatban a legalább négy ACR-kritériumot teljesítő betegek 100 szérumából 71 adott pozitív eredményt, szemben a 120 normál kontroll 6,7%-ával . A felismerés mintázata azonban eltér az emberekétől. Immunoblotok segítségével az SLE-ben szenvedő kutyák szérumainak 54%-a ismerte fel a H4-et, és ugyanennyien a H3-at. Nyolc százalék ismerte fel a H1-et, 22% a H2A-t és 20% a H2B-t . Egy másik vizsgálatban az SLE-ben szenvedő kutyák 43 szérumából egyetlen szérumban sem mutattak ki H2B elleni antitesteket. Ezzel szemben az emberben a H1 és a H2B markánsabb autoantigének . További különbség, hogy a hisztondeterminánsok, amelyek ellen a kutyaantitestek irányulnak, többnyire tripszinrezisztensek . Egy nemrégiben készült tanulmány egy áramlási citometriás, gyöngyökön alapuló vizsgálat kifejlesztéséről számolt be a kutyák hisztonellenes antitestjeinek kimutatására, de gyenge volt a korreláció e vizsgálat és az ANA standard immunfluoreszcens tesztje között . A közelmúltban 43 leishmaniosisban szenvedő kutyánál vizsgálták az antihiszton antitestek előfordulását . Szignifikánsan nagyobb volt az ilyen antitestek prevalenciája, amikor a fertőzött kutyák glomerulonefritiszben szenvedtek (22/25 állat), mint a vesekárosodás nélküli fertőzött kutyáknál (7/18).

A humán SLE-s betegek szérumai által felismert egyéb antigének közül sokat a kutyaszérumok is felismernek. Az SLE-ben szenvedő kutyák szérumainak mintegy 7%-a ribonukleoproteint (RNP) precipitál, további 12% pedig mind az RNP-t, mind az Sm antigént kimutatja. A nagy mozgékonyságú csoport (HMG) fehérjéket a szérumok 20%-a ismerte fel, a HMG1-et 6%, a HMG2-t pedig 18% ismerte fel. Egyetlen szérum sem ismerte fel a HMG14-et és a HMG17-et. A fent említett vizsgálatban három szérum tartalmazott anti-Sjögren-szindróma A antitestet (anti-SSA) is, de anti-SSB-t még nem mutattak ki.

Nagy érdeklődésre tartanak számot az SLE-ben szenvedő kutyapáciensek szérumaira jellemzőnek tűnő specifitású antitestek, amelyeket kezdetben anti-1 (vagy T1) és anti-2 (vagy T2) típusnak neveztek el . Ezek reagálnak az oldható nukleáris kivonatokkal, de a T2 antigén hiányzik a kivont nukleáris antigénkészítményekből. Az anti-T1 egy fő 43 kDa nukleáris antigén ellen irányul . A vizsgálatok megerősítették, hogy ez azonos azzal a 43 kDa glikoproteinnel, amelyet a Soulard és munkatársai által végzett vizsgálatokban egyes kutyák SLE szérumai felismertek. Ezt mostanra hnRNP G-ként azonosították, és az epitóp-térképezési vizsgálatok kimutatták, hogy a molekula egy második N-terminális régiója mellett egy 33 aminosavból álló központi motívumhoz is kötődik. Érdekes módon sok SLE-ben szenvedő kutya széruma reagál egy azonos molekulatömegű riboszóma-antigénnel is .

Négy olyan esetről számoltak be, amelyekben magas titerű antinukleoláris antitestet mutattak ki, és amelyek klinikai tünetei összeegyeztethetőek voltak az SLE-vel. Ezek közül három esetben a poliartritisz volt a fő tünet , bár egy esetben egyidejűleg immunmediált trombocitopénia, anémia, leukopénia és bőrkiütés is előfordult. Az antitestspecificitást megvizsgálták, és a szérumok három 110, 95 és 45 kDa polipeptidet mutattak ki, amelyek antigén szempontból keresztreaktívak .

A kutyák ANA-mintázata homogén, foltos, peremes és nukleoláris jelölés. A homogén és a foltos mintázat a leggyakoribb. Számos tanulmány tett kísérletet a specifikus antitestaktivitás és a nukleáris jelölési mintázat korrelálására. A korai vizsgálatok kimutatták, hogy az anti-T1 (hnRNP G) viszonylag finom pettyes mintázatot, az anti-Sm és az anti-RNP durvább pettyes vagy retikulonoduláris mintázatot, az antihiszton antitest pedig általában homogén mintázatot ad. Újabb vizsgálatokban immunodiffúziót , ELISA-t és immunoblotokat alkalmaztak. A kromoszóma-reaktivitást mutató szérumok homogén nukleáris fluoreszcencia-mintázatot mutatnak, és a kereskedelemben kapható ENA-készítményekkel végzett immunodiffúziós analízis során nem csapadékosodnak ki. A negatív kromoszóma-reaktivitást mutató szérumok nagyobb valószínűséggel mutatnak foltos mintázatot, és egy részük pozitív az immundiffúziós vizsgálat során. Az anti-RNP és az anti-Sm esetében azonos vonalakat mutattak ki a humán reaktív szérumokkal. Az ELISA és az immunoblotok során leggyakrabban felismert autoantigén a hnRNP G volt, amely antigén hiányzik a humán szérumok vizsgálatára készült, kereskedelmi forgalomban kapható kivonatból. Az anti-RNP-aktivitás vizsgálata megerősítette, hogy a kutyaszérumok a 70K fehérje ugyanazon teljes fő antigén régiójával reagálnak, mint a humán szérumok .

Egy nemrégiben végzett vizsgálat először vetette fel, hogy a nukleáris jelölés mintázata, a kicsapó antitestek jelenlétével vagy hiányával együtt vizsgálva, klinikai jelentőséggel bírhat. A pettyezett nukleáris jelölés kicsapó antitestek hiányában gyakrabban fordult elő mozgásszervi betegségben szenvedő kutyáknál, míg a multiszisztémás immunmediált betegségben szenvedő kutyáknál gyakrabban volt homogén nukleáris jelölés és kicsapó antitestek .