Anti-dsDNA Antibodies

Swoistość antygenowa psiego ANA

Przeciwciała anty-dsDNA są rzadko spotykane u psów z SLE. U psów kwaśna β-globulina, która nie jest przeciwciałem, wiąże się z DNA, a także z syntetycznym dwuniciowym analogiem DNA – polideoksyadenylanem-deoksytymidylanem (dAdT). Białko to prowadzi do fałszywie dodatnich reakcji, gdy stosowane są techniki oparte na teście Farr. Natura tego białka jest słabo scharakteryzowana. Jest ono termolabilne i ulega zniszczeniu w wyniku ogrzewania przez 30 min w 60°C, ale nie w 58°C. Nie wiąże się z gronkowcowym białkiem A, nie wydaje się być glikoproteiną, o czym świadczy brak wiązania z lektyną soczewicy i jest częściowo hamowane przez dodanie EDTA, a bardziej całkowicie przez dodanie siarczanu dekstranu. Interferencja może być również zahamowana przez dodanie dodecylosiarczanu sodu oraz przez zastosowanie zwiększonej siły jonowej i pH buforów .

Wykrywanie anty-dsDNA w surowicach psich jest zatem problematyczne. Inne systemy wykrywania obejmowały pośrednią immunofluorescencję z wykorzystaniem Crithidia luciliae lub Trypanosoma brucei oraz techniki ELISA wykorzystujące wysoce oczyszczone dsDNA. We wszystkich badaniach techniki immunofluorescencji wykazują w najlepszym przypadku niską częstość występowania słabych reakcji dodatnich. W dwóch kolejnych badaniach wykorzystujących kombinację pośredniej immunofluorescencji i ELISA, rzadko obserwowano reakcje pozytywne. Białko wiążące DNA w normalnej surowicy psów może, oprócz zakłócania testu Farra, również zakłócać wiązanie specyficznych przeciwciał anty-dsDNA w teście ELISA. Jednakże, w badaniu, które dotyczyło tej kwestii, żadna z badanych surowic psich nie była w stanie zahamować wiązania monoklonalnego przeciwciała anty-DNA pochodzącego od myszy. Jednakże, jedno badanie wykorzystujące komercyjny system ELISA wykazało stosunkowo wysokie wiązanie DNA w surowicach psów z SLE i w mniejszym stopniu psów z innymi artropatiami. Autorzy tego ostatniego zauważyli, że surowice, które dawały wysokie wartości wiązania dsDNA wiązały się również silnie z jednoniciowym (ss)DNA, sugerując możliwe zanieczyszczenie substratu dsDNA przez ssDNA .

Potwierdzenie obecności anty-ssDNA nie ma wartości w diagnostyce SLE u psów. W jednym z badań, surowice od 21% ze 100 psów z SLE dały wynik pozytywny, podobnie jak 14% psów z pozytywnym ANA, ale mniej niż cztery kryteria dla SLE, i 26,8% z 56 psów z różnymi chorobami zakaźnymi, w tym leiszmaniozą .

Występowanie przeciwciał antyhistonowych jest wysoce skorelowane z pozytywnym rozpoznaniem SLE . W najbardziej obszernym badaniu, 71 ze 100 surowic od pacjentów spełniających co najmniej cztery kryteria ACR dało wynik pozytywny, w porównaniu z 6,7% ze 120 normalnych kontroli. Wzorzec rozpoznawania różni się jednak od tego u ludzi. Używając immunoblotów, 54% surowic od psów z SLE rozpoznało H4, z taką samą liczbą rozpoznającą H3. Osiem procent rozpoznało H1, 22% H2A, i 20% H2B . W innym badaniu, przeciwciała H2B nie zostały wykryte w żadnej z 43 surowic psów z SLE . W przeciwieństwie do tego, H1 i H2B są bardziej znaczącymi autoantygenami u człowieka . Kolejną różnicą jest to, że determinanty histonowe, przeciwko którym skierowane są przeciwciała psów, są w większości odporne na trypsynę. W jednym z ostatnich badań opisano opracowanie opartego na paciorkach testu cytometrii przepływowej do wykrywania przeciwciał antyhistonowych u psów, ale stwierdzono słabą korelację pomiędzy tym testem a standardowym testem immunofluorescencyjnym dla ANA. Częstość występowania przeciwciał antyhistonowych została ostatnio zbadana u 43 psów z leiszmaniozą. Stwierdzono znacznie większą częstość występowania takich przeciwciał, gdy zakażone psy miały kłębuszkowe zapalenie nerek (22/25 zwierząt) w porównaniu z zakażonymi psami bez uszkodzenia nerek (7/18).

Wiele innych antygenów, które są rozpoznawane przez surowice pochodzące od ludzkich pacjentów z SLE, jest również rozpoznawanych przez surowice psów. Około 7% surowic psów chorych na SLE wytrąca rybonukleoproteinę (RNP), a kolejne 12% wykrywa zarówno RNP jak i antygen Sm . Białka grupy wysokiej ruchliwości (HMG) były rozpoznawane przez 20% surowic, z czego HMG1 przez 6%, a HMG2 przez 18%. Żadna z surowic nie rozpoznała HMG14 i HMG17. W wyżej wymienionym badaniu, trzy surowice zawierały również przeciwciało przeciwko zespołowi Sjögrena A (anty-SSA), ale anty-SSB nie zostało jeszcze wykryte.

Wielkim zainteresowaniem cieszą się przeciwciała o specyficzności, która wydaje się być unikalna dla surowic pochodzących od psich pacjentów z SLE, które początkowo określano jako anty-typ 1 (lub T1) i anty-typ 2 (lub T2) . Są one reaktywne z rozpuszczalnymi ekstraktami jądrowymi, ale antygen T2 jest nieobecny w preparatach ekstrahowanych antygenów jądrowych. Anty-T1 jest skierowany przeciwko głównemu antygenowi jądrowemu o masie 43-kDa. Badania potwierdziły, że jest on identyczny z glikoproteiną 43-kDa rozpoznawaną przez niektóre surowice psiego SLE w badaniach Soularda i wsp. Została ona obecnie zidentyfikowana jako hnRNP G, a badania mapowania epitopów wykazały wiązanie do centralnego motywu 33 aminokwasów, oprócz drugiego N-końcowego regionu cząsteczki. Co ciekawe, wiele surowic psów z SLE reaguje również z antygenem rybosomalnym o identycznej masie cząsteczkowej .

Zanotowano cztery przypadki, z objawami klinicznymi zgodnymi z SLE, w których wykryto przeciwciała antyjądrowe w wysokim mianie. W trzech z nich, zapalenie wielostawowe było głównym objawem, chociaż jeden przypadek miał równoczesną immunologiczną trombocytopenię, niedokrwistość, leukopenię i wysypkę skórną. Zbadano swoistość przeciwciał i stwierdzono, że surowice wykrywają trzy polipeptydy o masie 110, 95 i 45 kDa, które są antygenowo reaktywne krzyżowo.

Wzory psiego ANA obejmują znakowanie homogenne, plamiste, obręczowe i jąderkowe. Najczęściej spotykane są wzory homogenne i plamiste. W wielu badaniach próbowano skorelować specyficzną aktywność przeciwciał z wzorcami znakowania jąder. Wczesne badania wykazały, że anty-T1 (hnRNP G) daje stosunkowo drobny wzór plamisty, anty-Sm i anty-RNP daje grubszy wzór plamisty lub retikulonodularny, a przeciwciało antyhistonowe daje ogólnie jednorodny wzór. W nowszych badaniach zastosowano immunodyfuzję, ELISA i immunobloty. Surowice, które wykazują reaktywność chromosomalną wykazują jednorodny wzór fluorescencji jądrowej i nie wytrącają się podczas analizy immunodyfuzji z wykorzystaniem dostępnych w handlu preparatów ENA. Surowice, które wykazują negatywną reaktywność chromosomalną, częściej wykazują wzór plamisty, a część z nich jest pozytywna w badaniu immunodyfuzyjnym. Linie identyczności z ludzkimi surowicami reaktywnymi zostały wykazane w przypadku anty-RNP i anty-Sm . Autoantygenem rozpoznawanym najczęściej w ELISA i immunoblotach był hnRNP G, antygen nieobecny w komercyjnie dostępnym ekstrakcie sporządzonym do badania surowic ludzkich. Badanie aktywności anty-RNP potwierdziło, że surowice psie reagują z tym samym pełnym głównym regionem antygenowym białka 70K, co surowice ludzkie .

W ostatnim badaniu po raz pierwszy zasugerowano, że wzór znakowania jądrowego, rozważany w połączeniu z obecnością lub brakiem przeciwciał strącających, może mieć znaczenie kliniczne. Speckled nuclear labeling przy braku przeciwciał strącających częściej występował u psów z chorobą układu mięśniowo-szkieletowego, podczas gdy psy z wielosystemową chorobą immunologiczną częściej miały jednorodne jądrowe znakowanie i przeciwciała strącające .

.