Anti-dsDNA Antibodies
Antigen specificities of canine ANA
Anti-dsDNA antibodies are rarely encountered in dogs with SLE. Em cães, um ácido β-globulina, que não é um anticorpo, liga-se ao ADN e também ao ADN sintético de dupla cadeia análoga poldeoxiadenilato desoxitimidilato (dAdT) . Esta proteína leva a reacções falso-positivas quando são utilizadas técnicas baseadas no ensaio Farr . A natureza desta proteína é mal caracterizada. Ela é aquecida por 30 minutos a 60°C, mas não a 58°C . Não se liga à proteína estafilocócica A, não parece ser uma glicoproteína, como evidenciado por uma falha na ligação à lectina lentilha, e é parcialmente inibido pela adição de EDTA e mais completamente pela adição de sulfato de dextrano . A interferência também pode ser inibida pela adição de dodecyl sulfato de sódio e pelo uso de maior força iônica e pH dos tampões .
A detecção de antidsDNA em soros caninos é, portanto, problemática. Outros sistemas de detecção incluíram a imunofluorescência indirecta empregando Crithidia luciliae ou Trypanosoma brucei e técnicas ELISA empregando dsDNA altamente purificado. Em todos os estudos, as técnicas de imunofluorescência mostram, na melhor das hipóteses, uma baixa incidência de reacções positivas fracas. Em mais dois estudos que utilizaram uma combinação de imunofluorescência indirecta e ELISA, raramente foram observadas reacções positivas. A proteína que liga o ADN em soros caninos normais poderia, além de interferir com o ensaio de Farr, também interferir com a ligação de anticorpos anti-dsDNA específicos no ELISA. No entanto, num estudo que abordou esta questão, nenhum dos soros caninos testados foi capaz de inibir a ligação de um anticorpo monoclonal anti-DNA murino. No entanto, um estudo que empregou um sistema ELISA comercial mostrou uma ligação relativamente alta de ADN em soros de cães com LES e, em menor grau, de cães com outras artrópsias. Estes últimos autores observaram que soros que deram altos valores de ligação de dsDNA também se ligaram fortemente ao (ss)DNA de cordão único, sugerindo possível contaminação do substrato de dsDNA com ssDNA .
Demonstração da presença de antissDNA não tem valor no diagnóstico de LES em cães. Em um estudo, soros de 21% de 100 cães com LES deram resultados positivos, assim como 14% dos cães com ANA positivo, mas menos de quatro critérios para LES, e 26,8% de 56 cães com doenças infecciosas diversas, incluindo leishmaniose .
A presença de anticorpos anti-histônicos está altamente correlacionada com um diagnóstico positivo de LES . No estudo mais extenso, 71 de 100 soros de pacientes que preencheram pelo menos quatro critérios de ACR deram resultados positivos, em comparação com 6,7% de 120 controles normais . O padrão de reconhecimento, no entanto, difere do padrão de reconhecimento em humanos. Usando immunoblots, 54% dos soros de cães com LES reconheceram H4, com o mesmo número reconhecendo H3. Oito por cento reconhecem H1, 22% H2A, e 20% H2B . Em outro estudo, os anticorpos para H2B não foram detectados em nenhum dos 43 soros de cães com LES . Em contraste, H1 e H2B são autoanticorpos mais proeminentes no homem . Uma outra diferença é que os determinantes do historial contra os quais os anticorpos caninos são dirigidos são na sua maioria resistentes à tripsina . Um estudo recente relatou o desenvolvimento de um ensaio citométrico de fluxo à base de esferas para a detecção de anticorpos caninos anti-histônicos, mas houve fraca correlação entre este ensaio e o teste padrão de imunofluorescência para ANA . A prevalência de anticorpos anti-histônicos foi recentemente examinada em 43 cães com leishmaniose. Houve uma prevalência significativamente maior de tais anticorpos quando cães infectados tinham glomerulonefrite (22/25 animais) em comparação com cães infectados sem danos renais (7/18).
Muitos dos outros antigénios que são reconhecidos pelos soros de doentes humanos com LES também são reconhecidos pelos soros caninos. Cerca de 7% dos soros de cães com LES precipitam a ribonucleoproteína (RNP), e outros 12% detectam tanto o RNP como o antígeno Sm. As proteínas do grupo de alta mobilidade (HMG) foram reconhecidas por 20% dos soros, com HMG1 detectado por 6%, e HMG2 por 18%. Não foram reconhecidos soros HMG14 e HMG17. No estudo acima mencionado, três soros também continham a síndrome de Sjögren Um anticorpo (anti-SSA), mas o anti-SSB ainda não foi detectado.
De grande interesse são anticorpos com uma especificidade que parece ser única para soros de doentes caninos com LES, que foram inicialmente denominados anti-tipo 1 (ou T1) e anti-tipo 2 (ou T2) . Estes são reactivos com extractos nucleares solúveis, mas o antigénio T2 está ausente das preparações de antigénio nuclear extraído. O anti-T1 é dirigido contra um grande antígeno nuclear 43-kDa . Estudos confirmaram que este é idêntico à glicoproteína 43-kDa reconhecida por alguns soros de LES caninos nos estudos de Soulard et al. . Isso agora foi identificado como hnRNP G e os estudos de mapeamento epitópopofe demonstraram ligação a um motivo central de 33 aminoácidos além de uma segunda região N-terminal da molécula . Curiosamente, muitos soros de cães com LES também reagem com um antígeno ribossômico de peso molecular idêntico .
Quatro casos, com sinais clínicos compatíveis com o LES, foram relatados nos quais um anticorpo antinucleolar de alto teor foi detectado. Em três destes, a poliartrite foi um sinal importante, embora um caso tivesse trombocitopenia, anemia, leucopenia e erupção cutânea concomitantes. A especificidade dos anticorpos foi examinada, e os soros detectam três polipeptídeos de 110, 95 e 45 kDa, que são antigenicamente reativos cruzados .
P>Padrão de ANA canino incluem padrões homogêneos, salpicados, borda, e marcação nucleolar. Os padrões homogêneos e salpicados são os mais comuns. Vários estudos têm tentado correlacionar a atividade de anticorpos específicos com padrões de rotulação nuclear. Estudos iniciais demonstraram que o anti-T1 (hnRNP G) dá um padrão salpicado relativamente fino, o anti-Sm e o anti-RNP dão um padrão salpicado mais grosseiro, ou padrão reticulonodular, e o anticorpo anti-histone dá um padrão geralmente homogêneo. Estudos mais recentes têm empregado imunodifusão , ELISA e immunoblots . Os soros que apresentam reatividade cromossômica exibem um padrão de fluorescência nuclear homogêneo e não precipitam na análise de imunodifusão usando preparações de ENA disponíveis comercialmente. Os soros que apresentam reatividade cromossômica negativa têm maior probabilidade de apresentar padrões salpicados, e uma proporção é positiva na imunodifusão. As linhas de identidade com soros reactivos humanos foram mostradas no caso dos anti-RNP e anti-Sm . O autoantigénio mais frequentemente reconhecido no ELISA e nos immunoblots foi o hnRNP G, um antigénio ausente do extracto comercialmente disponível feito para o exame de soros humanos. O exame da atividade anti-RNP confirmou que os soros caninos reagem com a mesma região antigênica principal completa da proteína 70K que os soros humanos .
Um estudo recente sugeriu pela primeira vez que o padrão de rotulagem nuclear, considerado em conjunto com a presença ou ausência de anticorpos precipitantes, pode ter significado clínico. A etiquetagem nuclear na ausência de anticorpos precipitantes ocorreu mais frequentemente em cães com doença músculo-esquelética, enquanto cães com doença imune multissistêmica tiveram mais frequentemente etiquetagem nuclear homogênea e anticorpos precipitantes .