Anti-anticorpii anti-ADNdS

Specificitățile antigenice ale ANA canin

Anti-anticorpii anti-ADNdS sunt rar întâlniți la câinii cu LES. La câini, o β-globulină acidă, care nu este un anticorp, se leagă de ADN și, de asemenea, de analogul sintetic de ADN dublu catenar polideoxiadenilat-deoxitimidilat (dAdT) . Această proteină duce la reacții fals-pozitive atunci când se utilizează tehnici bazate pe testul Farr . Natura acestei proteine este slab caracterizată. Este labilă la căldură și este distrusă prin încălzire timp de 30 de minute la 60°C, dar nu și la 58°C . Nu se leagă de proteina stafilococică A, nu pare a fi o glicoproteină, după cum reiese din faptul că nu se leagă de lectina de linte, și este inhibată parțial prin adăugarea de EDTA și mai complet prin adăugarea de sulfat de dextran. Interferența poate fi, de asemenea, inhibată prin adăugarea de dodecil sulfat de sodiu și prin utilizarea unei forțe ionice și a unui pH crescut al tampoanelor .

Detecția anti-dsDNA în serurile canine este, prin urmare, problematică. Alte sisteme de detecție au inclus imunofluorescența indirectă care utilizează Crithidia luciliae sau Trypanosoma brucei și tehnici ELISA care utilizează dsADN foarte purificat. În toate studiile, tehnicile de imunofluorescență prezintă, în cel mai bun caz, o incidență scăzută a reacțiilor pozitive slabe. În alte două studii care utilizează o combinație de imunofluorescență indirectă și ELISA, reacțiile pozitive au fost rareori observate . Proteina de legare a ADN din serurile canine normale ar putea, pe lângă faptul că interferează cu testul Farr, să interfereze și cu legarea anticorpilor specifici anti-ADNdS în ELISA. Cu toate acestea, într-un studiu care a abordat această problemă, niciunul dintre serurile canine testate nu a fost capabil să inhibe legarea unui anticorp monoclonal anti-DNA murin. Cu toate acestea, un studiu care a utilizat un sistem ELISA comercial a arătat o legătură relativ mare cu ADN în serurile de câini cu LES și, într-o mai mică măsură, de câini cu alte artropatii . Aceștia din urmă autori au observat că serurile care au dat valori ridicate de legare a dsADN se legau, de asemenea, puternic la ADN monocatenar (ss), sugerând o posibilă contaminare a substratului dsADN cu ssADN .

Demonstrarea prezenței anti-ssADN nu are nicio valoare în diagnosticul de LES la câini. Într-un studiu, serurile de la 21% din 100 de câini cu LES au dat rezultate pozitive, la fel ca și 14% din câinii cu ANA pozitiv, dar cu mai puțin de patru criterii pentru LES, și 26,8% din 56 de câini cu diverse boli infecțioase, inclusiv leishmanioză .

Prezența anticorpilor antihistonici este puternic corelată cu un diagnostic pozitiv de LES . În cel mai amplu studiu, 71 din 100 de seruri de la pacienți care îndeplineau cel puțin patru criterii ACR au dat rezultate pozitive, în comparație cu 6,7% din 120 de controale normale . Cu toate acestea, modelul de recunoaștere diferă de cel de la om. Folosind imunobloturi, 54% din serurile de la câini cu LES au recunoscut H4, cu același număr recunoscând H3. Opt procente au recunoscut H1, 22% H2A, și 20% H2B . Într-un alt studiu, anticorpii împotriva H2B nu au fost detectați în niciunul dintre cele 43 de seruri de la câini cu LES . În schimb, H1 și H2B sunt autoantigene mai proeminente la om . O altă diferență constă în faptul că determinanții histonici împotriva cărora sunt direcționați anticorpii canini sunt în mare parte rezistenți la tripsină . Un studiu recent a raportat dezvoltarea unui test citometric în flux pe bază de bile pentru detectarea anticorpilor anti-histonici canini, dar a existat o corelație slabă între acest test și testul standard de imunofluorescență pentru ANA . Prevalența anticorpilor antihistonici a fost examinată recent la 43 de câini cu leishmanioză . A existat o prevalență semnificativ mai mare a acestor anticorpi atunci când câinii infectați prezentau glomerulonefrită (22/25 de animale) în comparație cu câinii infectați fără leziuni renale (7/18).

Mulți dintre ceilalți antigeni care sunt recunoscuți de serurile de la pacienții cu LES uman sunt, de asemenea, recunoscuți de serurile canine. Aproximativ 7% din serurile de la câinii cu LES precipită ribonucleoproteina (RNP), iar alte 12% detectează atât RNP, cât și antigenul Sm . Proteinele grupului de mare mobilitate (HMG) au fost recunoscute de 20% din seruri, HMG1 fiind detectat de 6%, iar HMG2 de 18%. Niciun ser nu a recunoscut HMG14 și HMG17. În studiul menționat mai sus, trei seruri conțineau, de asemenea, anticorpi anti-sindromul Sjögren A (anti-SSA), dar anticorpii anti-SSB nu au fost încă detectați.

De mare interes sunt anticorpii cu o specificitate care pare a fi unică pentru serurile de la pacienții canini cu LES, care au fost numiți inițial anti-tip 1 (sau T1) și anti-tip 2 (sau T2) . Aceștia sunt reactivi cu extractele nucleare solubile, dar antigenul T2 este absent din preparatele de antigen nuclear extras. Anti-T1 este îndreptat împotriva unui antigen nuclear major de 43 kDa . Studiile au confirmat că acesta este identic cu glicoproteina de 43 kDa recunoscută de unele seruri de LES canin în studiile lui Soulard și colab. Aceasta a fost acum identificată ca fiind hnRNP G, iar studiile de cartografiere a epitopilor au demonstrat legarea la un motiv central de 33 de aminoacizi în plus față de o a doua regiune N-terminală a moleculei . Interesant este faptul că multe seruri de la câini cu LES reacționează, de asemenea, cu un antigen ribosomal cu o greutate moleculară identică .

Au fost raportate patru cazuri, cu semne clinice compatibile cu LES, în care a fost detectat un anticorp antinucleolar cu titru ridicat. În trei dintre acestea, poliartrita a fost un semn principal de prezentare , deși un caz a avut concomitent trombocitopenie mediată imunitar, anemie, leucopenie și erupție cutanată . A fost examinată specificitatea anticorpilor, iar serurile detectează trei polipeptide de 110, 95 și 45 kDa, care au reactivitate încrucișată din punct de vedere antigenic .

Programele ANA canine includ marcarea omogenă, pătată, cu jante și nucleolară. Tiparele omogen și pătat sunt cele mai frecvente. Un număr de studii au încercat să coreleze activitatea specifică a anticorpilor cu modelele de marcare nucleară. Studiile timpurii au demonstrat că anti-T1 (hnRNP G) oferă un tipar speckled relativ fin, anti-Sm și anti-RNP oferă un tipar speckled mai grosier sau un tipar reticulonodular, iar anticorpul antihistonă oferă un tipar în general omogen . Studii mai recente au utilizat imunodifuzia, ELISA și imunobloturile. Serurile care prezintă reactivitate cromozomială prezintă un model de fluorescență nucleară omogenă și nu precipită la analiza prin imunodifuzie folosind preparate ENA disponibile în comerț. Serurile care prezintă o reactivitate cromozomială negativă au mai multe șanse de a prezenta modele pătate, iar o parte dintre acestea sunt pozitive la imunodifuzie. Liniile de identitate cu serurile reactive umane au fost evidențiate în cazul anti-RNP și anti-Sm . Autoantigenul recunoscut cel mai frecvent în ELISA și în imunobloturi a fost hnRNP G, un antigen absent din extractul disponibil în comerț realizat pentru examinarea serurilor umane. Examinarea activității anti-RNP a confirmat că serurile canine reacționează cu aceeași regiune antigenică majoră completă a proteinei 70K ca și serurile umane .

Un studiu recent a sugerat pentru prima dată că modelul de marcare nucleară, considerat împreună cu prezența sau absența anticorpilor precipitanți, poate avea semnificație clinică. Marcarea nucleară pestriță în absența anticorpilor precipitanți a apărut mai frecvent la câinii cu afecțiuni musculo-scheletice, în timp ce câinii cu boli multisistemice mediate imunitar au avut mai des o marcare nucleară omogenă și anticorpi precipitanți .

.